Coombsov test

Čo je Coombsov test?

Coombsov test sa používa na detekciu protilátok proti erytrocytom. Na stanovenie protilátok sa používa tzv. Coombsov sérum, ktoré sa získava zo séra králikov a je senzitizované na ľudské protilátky.
Test sa používa v prípade hemolytickej anémie, nekompatibility makaka rézus alebo krátko pred podozrením na transfúziu krvi. Hemolytická anémia je formou anémie a inkompatibilita s makakmi rhesus popisuje nekompatibilitu krvných skupín.
Existujú dva rôzne typy Coombsovho testu, priamy a nepriamy test sa líšia z hľadiska indikácie a vykonávania.

Dôvody Coombsovho testu

Ak existuje podozrenie na hemolytickú anémiu, použije sa priamy Coombsov test. Hemolytická anémia opisuje anémiu, pri ktorej sa krvné bunky predčasne rozpadajú v dôsledku poškodenia.
Pri autoimunitných ochoreniach, ako je systémový lupus erythematodes, reumatoidná artritída alebo chronická lymfatická leukémia, sa tvoria protilátky, ktoré sú namierené proti vlastným krvným bunkám tela (tzv. Erytrocyty). Väzba protilátok vedie k skorému rozkladu krvných buniek alebo k zhlukovaniu krvných buniek v cievach. Obidve vedú k poklesu hodnoty hemoglobínu.

Ďalšou indikáciou pre priamy Coombsov test je hemolytické neonatórne ochorenie, tu sa v tele matiek negatívnych na rézus vytvárajú protilátky proti faktoru rézus. Ak je nenarodené dieťa pozitívne na rézus, protilátky z materského môžu vstúpiť do krvného obehu plodu a tam iniciovať zvýšené odbúravanie krviniek. Novorodenci vynikajú závažnou anémiou a žltačkou.

Coombsov test sa používa pravidelne v transfúznej medicíne. Používa sa na stanovenie krvných skupín pred krvnou transfúziou (nočný test), pri ktorej sa malá vzorka krvi zmieša s rôznymi sérami z krvných skupín A, B, AB a 0. Ak krv zostáva tekutá, krv pacienta je kompatibilná s príslušnou krvnou skupinou. Môže sa uskutočniť transfúzia.

Nepriamy Coombsov test sa môže tiež použiť na hľadanie voľných protilátok v tele pacienta (test na vyhľadávanie protilátok), napr. počas vyšetrení v materstve, na prípravu na transfúziu pre onkologických pacientov alebo osoby, ktoré už dostali transfúziu krvi.

Tu nájdete všetko o tejto téme: Intolerancia Rh.

Prípravok

Pri príprave na Coombsov test sa najskôr pripravia séra s protilátkami, ktoré sa majú testovať. Plnia sa do rôznych skúmaviek alebo sa nanášajú na skúšobné karty.

V každodennej klinickej praxi, napr. pri nočnom teste sú už pripravené pripravené testovacie karty, ktoré je možné okamžite použiť. Ďalej sa z pacienta odoberie krv a pripraví sa na test. V závislosti od toho, aký typ Coombsovho testu sa vykonáva, je potrebné krvné bunky alebo sérum (tekutá časť krvi) pacienta.

Sekvencia

Ak sa vykoná priamy Coombsov test, červené krvinky sa odfiltrujú z krvi pacienta. Musí sa otestovať, či sa na nich nachádzajú protilátky typu IgG, ktoré v tele spôsobujú hemolytickú anémiu alebo nekompatibilitu krvných skupín. Sérum Coombs obsahuje protilátky proti ľudským protilátkam IgG. Zmes sa zahrieva (inkubuje) po dlhú dobu. Ak sú na červených krvinkách protilátky, zhlukujú sa a test je pozitívny.

Nepriamy Coombsov test pozostáva z dvoch častí. Cieľom je určiť protilátky, ktoré sú voľné v krvi a nie sú viazané na krvinky.
Tentokrát sa tekutá časť (sérum) filtruje z krvi pacienta. Najskôr sa do séra na skúšku pridajú červené krvinky. Ak sú v sére voľné protilátky, viažu sa na červené krvinky. Táto reakcia nie je viditeľná. Iba v druhom kroku, rovnako ako v priamom Coombsovom teste, sa pridá a zahreje sérum Coombs s protilátkami proti ľudským protilátkam. Aj v tomto prípade sa zhlukuje, ak je výsledok pozitívny.

Hodnotenie

Ak sa protilátky kombinujú s vhodným Coomsovým sérom, protilátky v sére (tekutá časť krvi) sa viažu na protilátky pacienta. Protilátky majú tvar Y, čo znamená, že sa môžu vždy viazať na dvoch väzobných partnerov, a tak vzájomne zosieťovať červené krvinky. Vytvára sa veľká akumulácia krviniek. Tieto zhluky sú viditeľné - krvné zhluky (zhluky) a test je pozitívny.
Ak pacient nemá vhodné protilátky, sérum zostáva kvapalné. Nevidíte žiadnu zmenu - test je negatívny.

Aké sú alternatívy?

Alternatívou k Coombsovmu testu je imunologická metóda ELISA (enzýmovo viazaný imunosorbentový test), pri ktorej sú určité protilátky označené enzýmom. Táto protilátka sa pridá do testovaného roztoku. Ak značené protilátky reagujú s protilátkami v testovanom roztoku, naviazaný enzým sa aktivuje a vytvorí farbivo. Zodpovedajúce skúmavky menia farbu - test je pozitívny.

Okrem postupu ELISA existuje aj blot WESTERN, ktorý sa často používa ako potvrdzujúci test pre pozitívny test ELISA.